Komar D. - Médica Anestesióloga (FAAAAR), Jefa del Serv. de Anest. del Hosp. de Pediatría (SAMIC) "Prof. Dr. Juan P. Garrahan".
Martinaschi S. J. - Farmacéutico Becario (Beca R. Carrillo -A. Oñativia).
Valora P. D. - Farmacéutico y Bioquímico, Jefe del Area de Farmacia del Hospital de Pediatría (SAMIC) "Prof. Dr. Juan P. Garrahan".
Sinissi M. - Anestesióloga (FAAAAR), Médica Principal del Hospital de Pediatría (SAMIC) "Prof. Dr. Juan P. Garrahan"
Cáceres Guido P. A. - Farmacéutico del Hospital de Pediatría (SAMIC) "Prof. Dr. Juan P. Garrahan"
Hospital de Pediatría (S.A.M.I.C.) "Prof. Dr. Juan P. Garrahan" (Buenos Aires - Argentina).


Introducción

Luego de una anestesia general, es habitual la utilización de mezclas analgésicas en el postoperatorio inmediato.

Existe gran variedad de las mismas, por lo que cuando comenzamos a utilizarlas en nuestro Hospital los farmacéuticos, con criterio, nos preguntaron como validábamos estas mezclas, en cuanto a la estabilidad de las mismas con el correr de las horas y si la utilización conjunta de distintos medicamentos en un mismo frasco no producía la formación de algún compuesto por simple reacción química. De hecho la literatura farmacéutica cita la incompatibilidad de algunas de nuestras mezclas habituales.

El criterio clínico de efectividad del tratamiento es el parámetro que seguimos utilizando en el Servicio de Anestesiología. Sin embargo hemos comenzado a trabajar en forma conjunta con el Área de Farmacia con el propósito de validar las mezclas que ya tenemos en uso, y en el futuro, todas las que se implementen. En este trabajo analizaremos la mezcla Ranitidina-Midazolam. La bibliografía 1, 2 y 3123 cita la formación inmediata de turbidez blanquecina a concentraciones de 50 mg./ml y 5 mg./ml respectivamente. Dado que al mezclar dichas drogas a concentraciones de 300 mcg/ml y 30 mcg/ml (concentraciones que se obtienen cuando se coloca en un sachet de solución fisiológica 0,9% de cloruro de sodio de 500 ml, 150 mg. de Ranitidina y 15 mg. de Midazolam) no se observa la incompatibilidad antes mencionada, decidimos verificar si se produce incompatibilidad física o química no observable a simple vista. En el primer caso mediante la observación microscópica óptica, buscando posible formación de cristales y para la segunda mediante la evaluación de la estabilidad en el momento de su preparación, así como también a las 24 horas de preparada en el sachet de 500 ml en las concentraciones citadas.


Materiales y Métodos4

A)   Se preparan las siguientes soluciones:

A₁) Preparación del testigo de Ranitidina 300 µg/ml: Se colocan 3 ampollas de Ranitidina (150 mg.) en un matraz aforado de 500 ml y se lleva a volumen con solución fisiológica de cloruro de sodio 0,9 %, se homogeneiza durante 1 minuto.

A₂) Preparación del testigo de Midazolam 30 µg/ml: Se coloca 1 ampolla de Midazolam (15 mg.) en un matraz de 500 ml y se lleva a volumen con solución fisiológica de cloruro de sodio 0,9%, se homogeniza durante 1 minuto.

A₃) Preparación de la mezcla de Ranitidina-Midazolam (300 µg/ml-30 µg/ml): Se colocan 3 ampollas de Ranitidina y 1 ampolla de Midazolam en un matraz aforado de 500 ml y se lleva a volumen con solución fisiológica de cloruro de sodio 0,9 %, se homogeniza durante 1 minuto.

A₄) Blanco para observación microscópica: Solución fisiológica 0,9 % de cloruro de sodio.

El estudio fue dividido en dos días, Día 1 (Hora Cero) y Día 2 (Hora 24). Los análisis de las soluciones se realizaron como se indica a continuación:

La solución A₁ y A₂ fue analizada por HPLC, siendo preparadas nuevas el Día 1 y el Día 2.

La soluciones A₃ fueron observadas microscópicamente y analizadas por HPLC en el momento de su preparación (Día 1), así como también a las 24 horas (Día 2). Conservándola en sachet de solución fisiológica, a temperatura ambiente.

1. Para la observación microscópica se utiliza un microscopio óptico con un aumento de 400 x. La mezcla se tratará de la siguiente forma:
   
   Una alícuota de 15 ml de la misma se centrifuga durante cinco minutos a 10.000 revoluciones por minuto (rpm), el líquido sobrenadante se descarta y se añade 0,1 ml de solución fisiológica 0,9 % agitando suavemente para lograr la resuspensión de los posibles cristales formados, luego se toma con la ayuda de una pipeta Pasteur una gota de este líquido y se la coloca sobre un portaobjeto cubriéndola con un cubreobjeto. Este mismo procedimiento se realiza para la observación del Blanco (solución fisiológica 0,9 %).
   
   
2. Para cuantificar las soluciones y la posible formación de algún producto en la mezcla se utiliza un equipo de HPLC (High Performance Liquid Chromatrography) con detector UV-VISIBLE "Agilent 1100 Series" (equipado con un inyector manual de 20 mcl) el cual permite al operador realizar la separación de las drogas de la mezcla y cuantificar la cantidad de las mismas mediante el análisis del área bajo la curva de cromatograma obtenido.

El sistema cromatográfico utilizado esta conformado por:

- Fase estacionaria: Fase reversa C_18.

- Fase móvil: Acetonitrilo: Metanol: Solución Buffer de PO₄H₂K regulada a pH = 7,4. (40: 20: 40)

- Temperatura de la corrida: temperatura ambiente (25 ºC)

- Velocidad de corrida: 1 ml/minuto

- l = 254 nm

- Volumen de inyección: 20 mcl.

A) Curva de calibración para la cuantificación de las correspondientes drogas: dicha curva se realiza con el objetivo de verificar que el sistema cromatográfico utilizado es lineal dentro del rango de concentraciones que se esta trabajando.

Se realizaron soluciones de Ranitidina de las siguientes concentraciones: 100; 200; 300; 400; 500 mcg/ml en solución fisiológica de cloruro de sodio 0,9 %. Las soluciones de Midazolam fuero de: 10; 20;30; 40; 60 µg/ml en solución fisiológica de cloruro de sodio 0,9 %.

Estas soluciones se inyectaron por duplicado en el equipo de HPLC midiendo automáticamente el área bajo la curva (ABC) del cromatograma por integración valle a valle entre los picos y construyendo con dichos datos la curva de calibración, la cual quedó expresada como: Area Bajo la Curva en función de la Concentración de Droga (ABC vs. Cp).

Así se pudo concluir que el método es lineal en los rangos de concentración antes mencionados (Fórmula de Regresión: y = 22,178x + 136,52 [R2 = 0,9998], Coeficiente de Variación f (%)=1,320), de esta forma se establece que existe una relación directamente proporcional entre el ABC arrojada por el integrador automático del equipo HPLC (Ley de Lambert-Beer). También se analizó la Variabilidad Intradía CV f (%) = 0,546 y la Variabilidad Interdía CV f (%) = 0,726.

Análisis de los resultados

1- Determinación crotográfica por HPLC:

Gráfico de corrida para el testigo de Ranitidina (300 mcg/ml) por HPLC

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Gráfico de corrida para el testigo de Midazolam (30 mcg/ml) por HPLC

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Ranitidina Gráfico de corrida para la mezcla: Ranitidina (300 mcg/ml) - Midazolam (30 mcg/ml) por HPLC

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